高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。下面将介绍它们各自的组成和特点。
1、进样系统一般采用隔膜进样器或高压进样室完成进样操作，进样量恒定。这有利于提高分析样品的重复性。
2. 输液系统 本系统包括高压泵、流动相储液器和梯度计三部分。高压泵的一般压力为l。47～4.4X107Pa，流量可调稳定。当高压流动相通过色谱柱时，可降低样品在柱内的扩散效应，加快柱内移动速度，提高分离度，回收样品。有利于保持样品的生物活性。流动相存储误差和梯度仪可以根据固定相和样品的性质改变流动相，包括改变洗脱液的极性、离子强度和pH值，或使用竞争性抑制剂或变性剂。这使得多种物质（即使只有一组差异或异构体）可以有效分离。
3、分离系统 系统包括色谱柱、连接管、恒温器等。色谱柱的长度一般为10-50cm（需要两根时，可在两者之间加一根连接管），内径为2-5mm，采用优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金制成。有粒径为5-10μm的固定相（由基质和固定液组成）。固定相中的基体由机械强度高的树脂或硅胶制成，它们都具有惰性（如碱性硅胶已被去除）、孔隙率（孔径可达1000?）和大比表面积，耦合用机械包被（同气相色谱固定相的制备），或各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度的碳链烷基）的化学偶联，等）或配体有机化合物。所以，这种固定的相对结构具有很好的选择性。例如，在多孔硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，可以分离成纤维细胞中的糖蛋白。另外，固定相基质粒小，柱床容易达到均匀致密的状态。很容易减少涡流扩散效应。基体粒径小，微孔浅，样品在微孔区传质短。这些有利于减小带宽和提高分辨率。根据柱效理论分析，基质粒径小且板的理论数N越大。这进一步证明基质粒径越小会提高分离度。此外，高效液相色谱恒温器可将温度从室温调节到60℃，通过提高传质速率缩短分析时间。，它可以提高色谱柱的效率。
4、检测系统 HPLC常用的检测器有紫外检测器、折光率检测器和荧光检测器。
(1)紫外检测器 该检测器适用于紫外光（或可见光）对具有吸收特性的样品的检测。其特点：应用范围广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等）；灵敏度高（检出限为10-10g/ml）；线性范围宽；对温度和流量变化不敏感；可以检测梯度溶液洗脱的样品。
(2) 示差折光检测器可以对所有与流动相检测器检测折射率不同的样品组分使用示差折光检测。目前，大部分碳水化合物化合物的检测都采用这种检测系统。该系统通用性强，操作简单，但灵敏度低（检出限为10-7g/ml），流动相的变化会引起折光率的变化。因此，它既不适合痕量分析，也不适合梯度洗脱样品的检测。
(3)荧光检测器对具有荧光的物质，在一定条件下，发射光的荧光强度和物质的浓度因此，本检测器仅适用于荧光有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度非常高（检出限为10-12~10- 14g/ml)，可用于梯度洗脱工作的痕量分析和检测。
5. 数据处理系统 该系统可以采集、存储、显示、打印和处理测试数据以分离样品，可以正确地进行制备或鉴定工作
