紫外分光光度法是根据物质的吸收光谱研究物质的组成、结构和相互作用的有效方法。紫外分光光度计可以在紫外可见光区随时选择不同波长的光。物质的吸收光谱是物质中的分子和原子吸收入射光中某些特定波长的光能，从而发生分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
以空白试剂为基准调零仪器时，比色杯窗材料的吸收、内外窗表面的散射、溶剂的吸收全部抵消，吸光度值获得的色度由显色溶液中待测浓度决定。此时吸光度值一般与试液浓度呈线性关系。吸光度值与被测浓度不存在线性关系，向下弯曲（负偏差）或向上弯曲（正偏差）导致偏离朗伯比尔定律的主要原因如下。
(1)非单色光的影响：紫外可见分光光度法采用连续光源和分光计分光，不可能得到真正理想的单色光；为了在测量时获得足够的光强，仪器必须保持一定的狭缝宽度。从狭缝射出并投射到被测材料上的光是一个有限宽度的光谱带——光谱通带。随着光谱带宽的增加，吸收光谱的分辨率降低并偏离朗伯比尔定律。
(2)非吸收光的影响：当从出射狭缝射出的光的光谱带宽大于吸收光谱带时，投射到被测材料上的光含有非吸收光。这不仅降低了灵敏度，而且使校准曲线向横坐标轴弯曲并偏离朗伯比尔定律。
(3)非平行光方向：当入射光与比色杯的光学平面不垂直时，通过被测物质的实际光程大于比色杯的厚度。这种情况的影响很小，一般可以忽略不计。
(4)散射效应：当被测材料不平整，含有小颗粒，如悬浮物或胶体颗粒等散射颗粒时，入射光穿过材料时，部分光线会发生散射损失，从而降低透射光的性质，增加实际吸光度，并导致偏离兰伯特比尔定律。
(5)荧光的影响：有些物质在吸收光后，可以发出波长接近入射光波长的荧光，导致朗缪尔比尔定律失效。化学反应的影响会对被测组分在被测溶液中的分布产生离解、缔合、光化学等影响，或与溶剂相互作用，使被测组分的吸收曲线发生明显变化，如形状、位置等。吸收峰的强度和精确结构会发生变化，这将导致偏离朗伯比尔定律。
(6)溶剂的影响：溶剂对吸收势的影响最大。辅助辐射会引起化合物的分解并导致偏离朗缪尔定律。
